巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)是一種19.02kDa的造血生長因子,含有162個氨基酸殘基。該蛋白的活性:形式為同源二聚體,由成骨細胞分泌。M-CSF可控制單核細胞、巨噬細f胞和骨髓祖細胞的生成、分化和功能。M-CSF能夠通過結合其受體CSF-1R激活 CSF-1信號通路。
一、體外細胞培養應用
原代巨噬細胞誘導:
推薦濃度20ng/ml,與RANKL(30ng/ml)聯用可誘導破骨細胞分化
培養體系需含10%胎牛血清的α-MEM培養基,37℃ CO?條件下培養
細胞系維持:
維持培養時建議5-10ng/ml,每2-3天換液
貼壁細胞傳代前需用含EDTA的胰酶消化
二、體內實驗應用
皮下注射方案:
常用劑量100-200μg/kg,每日1次連續3天
注射部位建議選擇肩胛骨間區或腹股溝
腹腔注射方案:
適用于快速動員,劑量可調整至50μg/kg
需確認無菌操作,避免腹腔感染
三、質量控制要點
活性驗證:
建議通過CCK-8法檢測細胞增殖活性(EC50約5-10ng/ml)
流式檢測CD11b和F4/80表達驗證分化效率
儲存條件:
凍干粉4℃可保存1個月,-20℃長期保存
溶解后分裝保存,避免反復凍融
四、注意事項
無菌操作:
所有操作需在生物安全柜內進行
建議使用0.22μm濾膜過濾
劑量調節:
首次使用建議進行劑量梯度測試(5-50ng/ml)
高濃度可能誘導細胞凋亡